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| 液相色譜儀常用檢查器的品種 |
| 檢查器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的改變轉(zhuǎn)化為可供檢查的信號，常用檢查器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。 1.紫外可見吸收檢查器（ultraviolet－visible detector，UVD） 紫外可見吸收檢查器（UVD）是HPLC中運(yùn)用zui廣泛的檢查器之一，簡直一切的液相色譜儀都配有這種檢查器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性規(guī)模寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強(qiáng)吸收物質(zhì)檢查限可達(dá)1ng，檢查后不損壞樣品，可用于制備，并能與任何檢查器串聯(lián)運(yùn)用。紫外可見檢查器的作業(yè)原理與構(gòu)造同通常分光光度計(jì)類似，實(shí)際上即是裝有活動(dòng)地的紫外可見光度計(jì)。 （1）紫外吸收檢查器 紫外吸收檢查器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)規(guī)模的接連波長，并裝置一個(gè)光柵型單色器，其波長挑選規(guī)模寬（190nm～800nm）。它有兩個(gè)流轉(zhuǎn)池，一個(gè)作參比，一個(gè)作丈量用，光源宣布的紫外光照射到流轉(zhuǎn)池上，若兩流轉(zhuǎn)池都經(jīng)過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下簡直無吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度持平，無信號輸出。當(dāng)組分進(jìn)入丈量池時(shí)，吸收必定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號輸出，輸出信號巨細(xì)與組分濃度有關(guān)。 約束：活動(dòng)相的挑選受到必定約束，即具有必定紫外吸收的溶劑不能做活動(dòng)相，每種溶劑都有截止波長，當(dāng)小于該截止波長的紫外光經(jīng)過溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢查器的作業(yè)波長不能小于溶劑的截止波長。 （2）光電二極管陣列檢查器（photodiode array detector， PDAD） 也稱疾速掃描紫外可見分光檢查器，是一種新式的光吸收式檢查器。它選用光電二極管陣列作為檢查元件，構(gòu)成多通道并行作業(yè)，一起檢查由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號，然后對二極管陣列疾速掃描收集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保存時(shí)刻(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)調(diào)查與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，然后敏捷決議具有*挑選性和靈敏度的波長。 單光束二極管陣列檢查器，光源宣布的光先經(jīng)過檢查池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使一切波長的光在接收器上一起被檢查。陣列式接收器上的光信號用電子學(xué)的辦法疾速掃描獲取出來，每幅圖象僅需求10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。 2．熒光檢查器（fluorescence detector， FD） 熒光檢查器是一種高靈敏度、有挑選性的檢查器，可檢查能發(fā)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可經(jīng)過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢查。其zui小檢查濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量剖析；通常情況下熒光檢查器的靈敏度比紫外檢查器約高2個(gè)數(shù)量級，但其線性規(guī)模不如紫外檢查器寬。 這些年，選用激光作為熒光檢查器的光源而發(fā)生的激光誘導(dǎo)熒光檢查器極大地增強(qiáng)了熒光檢查的信噪比，因此具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量剖析中得到廣泛運(yùn)用。 3. 示差折光檢查器（differential refractive Index detector， RID） 示差折光檢查器是一種濃度型通用檢查器，對一切溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用挑選性檢查器檢查的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢查器檢查。示差檢查器是根據(jù)接連測定樣品流路和參比流路之間折射率的改變來測定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，因?yàn)閮煞N物質(zhì)的折射率不一樣就會(huì)發(fā)生折射。只需樣品組分與活動(dòng)相的折光指數(shù)不一樣，就可被檢查，二者相差愈大，靈敏度愈高，在必定濃度規(guī)模內(nèi)檢查器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。 4. 電化學(xué)檢查器（elec）chemical detector， ED） 電化學(xué)檢查器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導(dǎo)等檢查器，屬挑選性檢查器，可檢查具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有機(jī)陰陽離子、生物安排和體液的代謝物、食物添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測定中獲得了廣泛的運(yùn)用。其間，電導(dǎo)檢查器在離子色譜中運(yùn)用zui多。 電化學(xué)檢查器的長處是： ①靈敏度高，zui小檢查量～般為ng級，有目可達(dá)pg級； ②挑選性好，可測定很多非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)； ③線性規(guī)模寬，通常為4～5個(gè)數(shù)量級； ④設(shè)備簡略，本錢較低； ⑤易于主動(dòng)操作。 5. 化學(xué)發(fā)光檢查器（c。iluminescence detector， CD） 化學(xué)發(fā)光檢查器是這些年發(fā)展起來的一種疾速、靈敏的新式檢查器，因其設(shè)備簡略、價(jià)廉、線性規(guī)模寬等長處。其原理是根據(jù)某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激起態(tài)勢反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)品，當(dāng)它們從激起態(tài)回來基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。因?yàn)槲镔|(zhì)激起態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)別離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與恰當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，致使發(fā)光物質(zhì)發(fā)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。 這種檢查器不需求光源，也不需求雜亂的光學(xué)系統(tǒng)，只需有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以必定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物敏捷而又均勻地混合發(fā)生化學(xué)發(fā)光，經(jīng)過光電倍增管將光信號成為電信號，就可進(jìn)行檢查。這種檢查器的zui小檢出量可達(dá)10-12g。 |
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